1、取出酶標記板,設(shè)置空白孔,在空白孔中依次加入100μL標準品。
2、分別標記樣品編號,并添加100μL稀釋樣品置于空白微孔中。
3、將酶標記板在37℃孵育30分鐘。
4、取出酶標簽板,扔掉其中的液體,并在每個孔充滿所用洗滌劑后立即扔掉液體。
5、在每個孔填充了應(yīng)用的洗滌劑后,輕輕搖動酶標記板30秒,從孔中搖動應(yīng)用的洗滌劑,并將酶標記板拍干在吸水紙上。
6、重復(fù)步驟55次,并將酶標簽板拍干在吸水紙上。
7、將100加入酶標記偶聯(lián)溶液的標準孔和樣品孔μL中。
8、將96孔板在37℃孵育30分鐘。
9、取出酶標簽板,扔掉其中的液體,并在每個孔充滿所施加的清潔劑后立即扔掉液體。
10、在每個孔重新填充洗滌劑應(yīng)用溶液后,在室溫下輕輕搖動酶標簽板30秒,然后從孔中搖動洗滌劑應(yīng)用溶液,并將酶標簽板拍干在吸水紙上。
11、重復(fù)步驟55次,并將酶標簽板拍干在吸水紙上。
12、將基板A50加入每個孔μl后立即加入基板B50輕輕搖動以混合。
13、酶標記板在37℃黑暗中孵育15分鐘。
14、向每個孔中加入50μL終止溶液,輕輕搖動并混合。
15、在酶標記上的450nm處測量OD;顯色后,應(yīng)在15分鐘內(nèi)進行測定。
16、根據(jù)制備的標準曲線計算樣品含量。